Descripción
AGAR TCBS
Aplicación y usos del Agar TCBS:
EL Agar TCBS (agar tiosulfato – citrato – bilis – sacarosa) es un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae y otras especies Vibrio a partir de muestras clínicas y de otras clases.
COMPONENTES DEL AGAR TCBS
- Sacarosa
- Agar liofilizado
- Peptona
- Citrato de sodio
- Tiosulfato de sodio
- Cloruro de sodio
- Bilis de Buey
- Extracto de levadura
- Citrato Férrico
- Azul de Bromotimol
CONTENIDO ESTUCHE-PRESENTACIÓN DEL AGAR TCBS
- Unidad. Paquete por 10 placas
MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS:
- Mechero de Bunsen
- Asas bacteriológicas
- Elementos de protección
- Incubadora a 35-37°C
- Guantes
- Cepas ATCC
METODOLOGÍA:
- Principio del método:
El extracto de levadura y la peptona proporcionan el nitrógeno y las vitaminas. El Citrato sódico, el Tiosulfato sódico, la Bilis de buey y es un agente selectivo que proporciona un pH alcalino para inhibir los microorganismos Gram positivos y suprimir los organismos coliformes.
El pH del medio se incrementa para favorecer el crecimiento de Vibrio cholerae porque este organismo es sensible a los entornos ácidos. La alta concentración de sodio favorece el crecimiento de Vibrio cholerae que es halotolerante y de otras especies de Vibrio, cuya mayoría es halofílica. La sacarosa es un carbohidrato fermentable, y el cloruro sódico estimula el crecimiento. El tiosulfato sódico es una fuente de azufre y actúa con el citrato férrico como indicador para detectar la producción de ácido sulfhídrico. El azul de bromotimol y el azul de timol son indicadores de pH.
- Criterios de desempeño y limitaciones del método:
El Agar TCBS (Agar Tiosulfato Citrato Bilis Sacarosa) es útil para el aislamiento de casi todas las especies de Vibrio. El único Vibrio que no crece en TCBS es V. hollisae.
- Preparación de reactivos:
El medio se encuentra listo para ser usado.
- Condiciones de almacenamiento y estabilidad de los reactivos:
El medio de cultivo debe ser conservado a una temperatura de 2-8°C, en su empaque original, evitando la exposición a la luz directa, no debe ser congelado con el fin de preservar el medio.
Almacenar las placas en posición invertida para evitar que el agua de condensación caiga sobre la superficie del medio.
- Espécimen o muestra
Uso en muestras clínicas, industriales o investigativas.
- Procedimiento:
- Contar con un lugar que tenga normas de asepsia estrictas.
- Para contar con una técnica estéril, realizar todo el procedimiento junto a la llama del mechero y/o en una cabina de flujo laminar.
- Tener asa estéril para la toma de muestra.
- Sembrar suavemente sobre la superficie del producto.
- Incubar las placas a 37°C en posición invertida, 18-24-48-72-120 horas, según las técnicas implementadas por cada laboratorio.
- Dependiendo de las exigencias del microorganismo almacenar en la atmósfera adecuada.
- Luego de la incubación, observar el cultivo, según las características de las colonias determinar los posteriores estudios.
CÁLCULO DE LOS RESULTADOS ANALÍTICOS:
CONTROL DE CALIDAD DEL AGAR TCBS
- Prueba Macroscópica:
- Apariencia: Medio de cultivo semisólido de color verde
- pH final: 8.6 ± 0.2 (25°C).
- Volumen: 19 mL ±.
- Prueba De Esterilidad: Se realiza una prueba de esterilidad sometiendo un número representativo del lote a incubación entre 24 y 120 horas, a 35-37°C.
- Prueba De Efectividad: La efectividad del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:
Microorganismos | Cepas | Crecimiento |
V. parahemolyticus | ATCC 17802 | Satisfactorio |
E. coli | ATCC 25922 | Inhibido |
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS DEL AGAR TCBS
- Para uso de diagnóstico in vitro.
- Utilizar el medio de cultivo antes de la fecha de expiración.
- Usar elementos de protección personal durante el uso del producto por la exposición a muestras potencialmente peligrosas
- El desecho del medio de cultivo se debe realizar, según los protocolos implementados por cada institución.
TECNOLOGÍA – EQUIPO UTILIZADO:
- APS One.
- Cabina de flujo laminar.
- Master Clave.
- Autoclave.
- Incubadora.
BIBLIOGRAFÍA:
- Flores, M., and D. Welch. 1992. Section 6. Mycology: culture media, p.6.7.1-6.7.3. In: H.D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D.